Een spectrofotometer wordt gebruikt voor het bepalen van de concentratie van bepaalde stoffen, zoals eiwitten, in een oplossing. In het algemeen, schijnt een licht door een cuvet gevuld met een steekproef. De hoeveelheid licht die wordt geabsorbeerd door het monster wordt gemeten. Aangezien stoffen licht in verschillende spectrale bereiken absorberen, moet de juiste golflengte worden ingesteld voor de analyse. Er zijn talloze manieren om het berekenen van de concentratie van de onbekende monsters door spectrofotometrie, maar met behulp van referentie standaarden geeft de beste nauwkeurigheid. Bovendien normen ook aangeven als de spectrofotometer is defect of andere problemen met de analyse.
Wat die u nodig hebt
- Spectrofotometer
- Referentie standaarden
- Onbekende monsters
- Excel, werkblad of grafische software
Berekening door rechte lijn vergelijkingen
Referentie standaarden aan het begin van de analyse te analyseren. Normen concentraties zijn bekend en worden gebruikt om apparatuur kalibreren en controleren van de nauwkeurigheid. Alle monsters moeten vallen binnen het werkbereik van de normen. Als dat niet het geval is, dan monsters moet worden verdund of de concentratie van normen verhoogd.
Het maken van een grafiek of lijn spreidingsgrafiek met standaard concentratie en absorptie lezingen. De concentratie zal liggen op de y-as, de extinctie op de x-as. De normen zijn bijvoorbeeld 1 ppm, 2,5 ppm en 5 ppm. De extinctie gegeven was 1 ppm =.25, 2,5 ppm =.5 en 5 ppm =.75.
Opmaken van de lijn van de tendens om een vergelijking in de grafiek weer te geven. De vergelijking toont de formule y = mx + b. Bijvoorbeeld met behulp van de normen in stap 2 de vergelijking is y = .1224x + 0.1531. Meeste trendlijnen worden onderschept op nul, maar het hangt af van de analysemethode en de R-kwadraat.
Onbekende monsters analyseren en opnemen van absorptie lezingen.
De vergelijking gebruiken (y = mx + b) om te bepalen van de concentratie van monsters.
Begrip rechte lijn vergelijking
Laat "Y" gelijk aan de concentratie. Dit is wat zal worden opgelost voor.
Laat "X" gelijk de extinctie van het monster. Dit is de extinctie gemeten door de spectrofotometer.
Toestaan "" op de helling en de "b" op het y-snijpunt gelijke gelijke. Beide worden gegeven, maar als de trendlijn werd gedwongen door 0, dan "b" zal worden 0.
Oplossen voor de concentratie. Met behulp van het voorbeeld in stap 3, vervangen door "x" als een bepaalde extinctie van.563. Daarom:
y =.1224(.563) + 0.1531
y (concentratie) =.222011
- De eenheden van de concentratie zal gelden voor de normen. Eenheden zijn bijvoorbeeld delen per miljoen (ppm) of delen per miljard (ppb).
- Referentie standaarden en monsters zijn gemakkelijk besmet.
- Altijd lezen alle delen van assay of methode voordat u gaat ontwikkelen.
